Hozirda ko'plab in vitro va in vivo klinik bo'lmagan-tadqiqot usullari, shuningdek, sotiladigan dori vositalarini ishlab chiqish tajribasi mavjud. Biroq, optimallashtirilgan klinik bo'lmagan{2}}tadqiqotlar orqali klinik samaradorlik va xavfsizlikni bashorat qilish qiyinligicha qolmoqda va ushbu maqolada ushbu masala bo'yicha chuqur tahlil-o'tkaziladi.
Ideal ADC kamida quyidagi uchta xususiyatga ega bo'lishi kerak:
1. Maqsadli bog'lanish qobiliyati: Ideal ADC maqsadli antijeni faqat o'simtalar yuzasida va yuqori darajada, oson to'kilmasdan ifodalanadi.
2. Transformatsiya jarayoni: maqsadli hujayralarga yetib borishdan oldin, sitotoksik molekula ideal holda ADC dan to'kilmasligi kerak, ya'ni butun ADC hujayralarga kiradi.
3. Toksin kichik molekulasini chiqarish: kichik molekula o'simta hujayralari ichida tez va ommaviy ravishda chiqarilishi kerak; kichik molekula o'simta hujayralarini samarali o'ldirish uchun yuqori toksiklikka ega bo'lishi kerak.
ADC uchun farmakologik baholash strategiyasi
Farmakologik ta'sirni o'rganish odatda preparatni kashf qilish yoki klinikadan oldingi baholash bosqichida o'tkaziladi. Amalga oshirilishi kerak bo'lgan asosiy eksperimental loyihalarga maqsadli bog'lanish faolligi, antikor{1}}vositachilik bilan intererizatsiya, in vivo va in vitro o'simta proliferatsiyasini inhibe qilish (o'simtaga qarshi ADClar uchun), antikorga-bog'liq hujayrali sitotoksisite (ADCC) va komplementga-bog'liq sitotoksiklik (CDC) kiradi.
Hayvonlarda ADC ning farmakodinamikasini o'rganayotganda, birinchi navbatda turlarning farqlari hisobga olinadi. Agar ADClar bog‘lanish faolligiga ega bo‘lmasa yoki sichqonlarda antigenlar bilan past bog‘lanish faolligiga ega bo‘lsa, farmakodinamik tajribalar uchun transgen hayvonlardan foydalanish yoki hayvonlardan olingan antikorlar-bilan in vivo farmakodinamik tadqiqotlar o‘tkazish haqida o‘ylash kerak. Transgen hayvonlar muqobil antikorlardan foydalanishdan qochishlari mumkin va maqsadli antijen xostning qon tomirlari yoki stromasida ifodalanganda, transgen hayvonlar nafaqat farmakodinamik ta'sirlarni baholashlari, balki ma'lum darajada toksiklik reaktsiyalarini ham kuzatishlari mumkin. Agar maqsadli antijen faqat inson o'simta hujayralarida ifodalangan bo'lsa, transgen hayvonlarga ehtiyoj yo'q; farmakodinamik ta'sirlarni inson o'simta hujayralari bilan implantatsiya qilingan yalang'och sichqoncha modellarida tekshirish mumkin. Hujayra darajasida yoki hayvonlar modeli darajasida farmakodinamik tadqiqotlar o'tkazishda, bir vaqtning o'zida PK/PD tadqiqotlarini o'tkazish, dori maqsadli taqsimotini, retseptorlarning to'ldirilish tezligini va dori ta'siri va ta'siri o'rtasidagi bog'liqlikni tahlil qilish klinik dozalash rejimlarini ishlab chiqishda va xavfsizlikni o'rganish natijalarini tahlil qilishda yordam beradi.
ADC uchun toksikologik baholash strategiyasi
Hayvon turlarini tanlash: ADC larning klinik rivojlanishini qoʻllab-quvvatlash uchun klinik boʻlmagan xavfsizlik tadqiqotlarida ADC ning zaharlilik xususiyatlarini toʻliq ochib berish uchun -hayvonlarning sinov turlarining dolzarbligini va klinik boʻlmagan tadqiqot natijalarining tarjima qilinishini baholash juda muhimdir. Bu aniqlash odatda odamlar bilan solishtirganda klinik bo'lmagan turlardagi ADC ning maqsadli antigenlarga -bag'ishlanishini tekshirishni, shuningdek, to'qimalarning o'zaro reaktivligini o'rganishda immunogistokimyoviy bo'yash spektrini solishtirishni o'z ichiga oladi. Antikorlarning effektor funktsiyalari yoki immunogenligi ham turlar farqiga qarab farq qilishi mumkin.
EHM parametrlari va metabolizmi: Bundan tashqari, boshqa dori vositalari va biologik mahsulotlar singari, klinik boʻlmagan tadqiqot natijalarini odamlarga -ekstrapolyatsiya qilishda taʼsir qilish parametrlari va metabolizmni taqqoslash ham boʻlishi kerak. Masalan, BR{7}}96 doksorubitsinni (DOX) 6-maleimidogeksanoik kislota gidrazid bog‘lovchisi orqali insoniylashtirilgan BR96 monoklonal antikorining sistein qoldiqlari bilan kovalent bog‘lash natijasida hosil bo‘lgan ADCdir. Toksikologiya tadqiqotlari shuni ko'rsatdiki, kalamush va maymunlardan farqli o'laroq, itlar BR-96 ning toksik ta'siriga ko'proq sezgir bo'lib, gemorragik enterit dozani cheklovchi toksik ta'sir ko'rsatadi. Ajablanarlisi shundaki, BR96-DOX va o'zgartirilmagan monoklonal antikor BR96 bir xil dozani cheklovchi toksiklikka ega, bu toksiklik monoklonal antikor tomonidan ishlab chiqarilganligini ko'rsatadi. O'zgartirilmagan DOXdan farqli o'laroq, ADC kalamush modellarida kardiyomiyopatiyani keltirib chiqarmadi. Shuning uchun odamlarda BR96-Doxning I bosqich klinik sinovi uchun dozani tanlash itlardagi toksikologiya natijalariga asoslangan edi.
Antikor maqsadli ifodasi: terapevtik monoklonal antikorlar singari, ADC ni klinik bo'lmagan-baholash hayvonlarning sinov turlarida antigen nishonlarining yo'qligi tufayli to'sqinlik qilishi mumkin. ICH S6 (R1) biotexnologiyadan olingan farmatsevtika vositalarining klinikadan oldingi xavfsizligini baholash boʻyicha yoʻriqnomada (2011) “Yangi toksinlar/toksinlarni oʻz ichiga olgan antikor{6}}dorilar/toksin konjugatlari (ADCs) uchun turlarni tanlashda monoboloniklar uchun sinovdan oʻtkazilmagan hayvonlarga nisbatan bir xil umumiy tamoyillarga amal qilish kerak. antikorlar kerakli epitopni ifodalovchi va inson toʻqimalariga oʻxshash toʻqimalarning oʻzaro reaktivlik spektrini-koʻrsatadigan antikorlardir, shuning uchun turlar va kasallikning oʻziga xosligi klinik boʻlmagan baholashni aniqlashi yoki cheklashi mumkin."
Maqsadli antigenning normal to'qimalarda ifodalanishi ADC terapiyasi uchun asosiy xavfsizlik muammosidir. Ideal holda, maqsadli antijen oddiy hujayralarda juda past darajada ifodalanishi kerak; ammo, yuqoridagi ikkita misolda aytib o'tilganidek, amalda antikorlar har doim ham o'ziga xos emas. ADC maqsadlari uchun o'ziga xoslikning yo'qligi bilan bog'liq boshqa potentsial toksiklik misollari orasida natriyga bog'liq fosfat tashuvchisi NaPi2b kiradi, u bir nechta o'sma turlarida ifodalangan, ammo noorganik fosfat gomeostazida rol o'ynaydigan oddiy to'qimalarda ham aniqlanadi. ADC (anti-NaPi2b-vc-MMAE) insoniylashtirilgan IgG1 anti-NaPi2b monoklonal antikorini vc peptid bog‘lovchisi orqali MMAEga konjugatsiya qilish yo‘li bilan ishlab chiqilgan va u oddiy odam va kramp to‘qimalarida o‘ziga xos bog‘lanish yaqinligi borligi tasdiqlangan.b. Biroq, maymunlarning oddiy o'pkalarida{13}}yuqori darajada ifodalanishiga qaramay, bu o'zaro{14}}reaktivlikning xavfsizligi to'qimalarning normal ifodalanishi bilan bog'liq bo'lmagan doza-cheklovchi toksiklik bilan qabul qilinishi mumkin. Oddiy kalamushlar, bogʻlanmaydigan turlar va maymunlardagi toksikologik taʼsirlar MMAE farmakologiyasiga mos keladi.
Umumiy toksikologiyani loyihalash tamoyillari: Umuman olganda, monoklonal antikor/yalangʻoch antikor, bogʻlovchi/bogʻlovchi{0}}toksin uchun alohida guruhlarni belgilashning hojati yoʻq, chunki monoklonal antikor molekulasi tizimli taʼsirga taʼsir qiluvchi yoki aniqlovchi asosiy omillardan biridir. Dozani loyihalashda ADC ning farmakodinamik dozasini, antikor molekulasining xususiyatlarini va kichik molekulali toksinning toksiklik xususiyatlarini hisobga olish kerak.
Foydali yuk-bilan bog'liq toksiklikka e'tibor qarating:Kichik molekula birikmalarining maqsadli chiqarilishi maqsadli to'qimalarda dori-darmonlarni boyitishga, terapevtik oynani yaxshilashga erishsa-da, ADC ning asosiy toksiklik xususiyatlari hali ham bog'langan kichik molekula birikmalariga o'xshashdir. Aksariyat ADC toksiklik reaktsiyalari kichik molekula birikmalarini to'g'ridan-to'g'ri qo'llashdan ko'ra jiddiyroqdir, biroq ba'zi ADClar antikorlarni maqsadli bog'lash yoki maqsaddan tashqari-bog'lanish bilan bog'liq bo'lgan to'qimalarning toksikligi reaktsiyalarini kuchaytirishi mumkin. ADC kichik molekula birikmalarining maqsadli chiqarilishini oshirsa-da, ba'zi kichik molekula birikmalari hali ham muddatidan oldin chiqariladi va ba'zi erkin kichik molekula birikmalari tezda tarqalib ketishi yoki atrofdagi to'qimalarga va maqsadli hujayralardan tizimli aylanishga o'tishi yoki maqsadli hujayralarning apoptozi va zararlanishi erkin kichik molekula birikmalarining tizimli aylanishga kirishiga olib kelishi mumkin. ADC ning antikor qismi, shuningdek, boshqa maqsadli bo'lmagan to'qima a'zosi hujayra yuzasi retseptorlari yoki epitoplar bilan ham bog'lanishi mumkin, masalan, Fc retseptorlari- vositachiligida hujayra fagotsitozi va preparat metabolik parchalanishdan keyin tegishli to'qimalar hujayralariga toksik ta'sir ko'rsatishi mumkin. Shuning uchun ADC ning toksikligi antikor, kichik molekulali birikmalar va bog'lovchilarning xususiyatlari bilan chambarchas bog'liq va ADC ning toksiklik xususiyatlarining o'zgarishi antikor, kichik molekula birikmalari va bog'lovchilarning o'zgarishi bilan sodir bo'ladi. Klinik xavfsizlik bo'yicha bo'lmagan{8}}tadqiqotlarda preparat tarkibi tuzilishi va farmakokinetik xususiyatlarining toksiklikka ta'siriga e'tibor qaratish va tajribalar natijalarini har tomonlama tahlil qilish kerak.
Genotoksisite:Biologik makromolekulalar odatda DNK bilan bevosita ta'sir o'tkazmaydi va ADC va uning antikor qismi odatda genotoksiklik testlaridan o'tishga hojat yo'q. ADC ning potentsial genotoksikligi kichik molekula birikmalaridan kelib chiqadi. Agar foydali yuk kichik molekulali birikma yangi birikma bo'lsa, genotoksiklik testlarini o'tkazish kerak; tanada ishlab chiqarilgan yangi erkin kichik molekulali birikmalar va / yoki yangi bog'lovchilar uchun maqsadli sinov materiallari ADClarning parchalanish mahsulotlarining fizik-kimyoviy xususiyatlari, parchalanish xususiyatlari va tuzilishi asosida baholanishi kerak; agar etarli ma'lumotlar maqsadli sinov materialining genotoksikligiga ega ekanligini ko'rsatsa, genotoksiklikni o'rganish kerak emas.
Reproduktiv toksiklik:ADC tarkibidagi kichik molekulali birikmalar, bog'lovchilar va yalang'och antikorlar reproduktiv organlarga, fertillikka, embrion{0}}xomilaning rivojlanishiga va nasl rivojlanishiga salbiy ta'sir ko'rsatishi mumkin, shuning uchun ADClarning reproduktiv toksiklik xavfiga e'tibor qaratish lozim. Tadqiqot strategiyasi, eksperimental loyihalash, amalga oshirish va ADC reproduktiv toksikligini baholash ICH S5 ko'rsatmalariga murojaat qilishi va muayyan muammo-maxsus tahlil strategiyasini qabul qilish uchun harakat mexanizmini va ADClarning maqsadli populyatsiyasini birlashtirishi kerak. O'simtaning kech{5}}bosqichidagi bemorlarga mo'ljallangan ADC reproduktiv toksiklikni o'rganish uchun ICH S9 ko'rsatmalariga murojaat qilishi mumkin.
Biologik mahsulotlar uchun reproduktiv toksiklik odatda farmakologik jihatdan tegishli hayvonlar turlarida baholanadi. Agar kemiruvchilar ham, quyonlar ham bir-biriga bog‘langan hayvonlar turlari bo‘lsa, embrionning o‘limi yoki teratogenligi tasdiqlanmasa, embrion-xomilaning rivojlanishiga toksiklik testlarini o‘tkazish uchun hayvonlarning ikkita turidan foydalanish kerak. Maqsadli hayvon turlari-bog'lanadigan hayvonlar turlari inson bo'lmagan{5}}primatlar bo'lsa yoki tegishli hayvon turlari bo'lmasa, kalamushlar yoki quyonlar odatda erkin kichik molekula birikmalarining reproduktiv toksikligini tekshirish uchun birinchi navbatda reproduktiv toksiklik testlari uchun ko'rib chiqiladi. Agar tadqiqot natijalari pozitivlikni tasdiqlasa, reproduktiv toksiklikni maqsad-bog'laydigan hayvonlar turlaridan foydalangan holda tekshirishning hojati yo'q; aks holda, antigen vositachiligidagi reproduktiv toksiklikni aniqlash uchun-inson bo'lmagan primatlar yoki transgen hayvonlar yoki muqobil molekulalar-ko'rib chiqilishi kerak. Agar ADCdagi antikor yoki kichik molekulali birikma reproduktiv toksiklik xavfini aniq ko'rsatuvchi adabiyot ma'lumotlariga ega bo'lsa, reproduktiv toksiklikni o'rganish kerak emas va tegishli xavf nazorati adabiyot ma'lumotlariga asoslanishi mumkin.
Kanserogenlik:ADC xususiyatlaridan kelib chiqqan holda, ICH S1, ICH S6, ICH S9 va boshqa tegishli ko'rsatmalarga muvofiq kanserogenlikni o'rganish zarurati ko'rib chiqilishi mumkin.
Immunogenlik/immunotoksiklik:ADClar organizmga kirgandan so'ng immunogenlikni keltirib chiqarishi mumkin va{0}}giyohvandlikka qarshi antikorlar hosil qiladi. ADC immunogenligini baholash preparatning farmakokinetikasi, samaradorligi va xavfsizligi natijalarini tahlil qilishga yordam beradi, shuning uchun anti{2}}dorilarga qarshi antikorlarni aniqlash odatda ADC ning klinik bo'lmagan{3}} xavfsizligini tadqiq qilishda hamroh bo'ladi. Giyohvand moddalarga qarshi antikorlar ADC ning antikor qismi va bog'lovchi qismidan ishlab chiqarilishi mumkin va antigen epitoplarini qo'shimcha tekshirish zarurligi immunogenlik xavfiga asoslanishi kerak. ADKlarning immunogenligini tahlil qilish uchun ishlab chiqish, tasdiqlash va analitik aniqlash strategiyasi “Dori vositalarining immunogenligini tadqiq qilish boʻyicha texnik yoʻriqnoma”ga muvofiq boʻlishi kerak. ADClar ICH S6, ICH S8, ICH S9 va boshqa ko'rsatmalarga murojaat qilishi va ADClarning turi va ta'sir mexanizmi kabi omillarga asoslangan immunotoksiklikni aniqlash ko'rsatkichlarini oqilona loyihalashi mumkin. Muntazam immunotoksiklik tadqiqotlariga qo'shimcha ravishda, agar kerak bo'lsa, qo'shimcha immunotoksisite tadqiqotlari o'tkazilishi kerak.
Optik xavfsizlik:I bosqich klinik sinovlari oldidan kichik molekula birikmalarining (shu jumladan bog'lovchilar) fotokimyoviy xususiyatlari va farmakologik/kimyoviy toifalari asosida potentsial fototoksiklik oldindan baholanishi kerak. Agar ushbu ma'lumotlar potentsial xavflarni ko'rsatsa, klinik sinov sub'ektlari uchun tegishli himoya choralarini ko'rish kerak. Agar -klinik boʻlmagan maʼlumotlar yoki klinik tajriba suratlar xavfsizligi xavfini toʻliq baholay olmasa, ICH S10 da tavsiflangan tamoyillarga muvofiq surat xavfsizligini baholash yirik-namunaviy klinik sinovlar (III bosqich) oldidan taqdim etilishi kerak.
To'qimalarning kesishishi{0}}reaktivligi:Toʻqimalarning oʻzaro reaktivligini oʻrganish in vitro toʻqimalarda antikorlar va antigen epitoplarining bogʻlanish xususiyatlarini aniqlash uchun immunohistokimyoviy usullardan foydalangan holda oʻtkaziladi. Toʻqimalarning oʻzaro reaktivligi-tadqiqotlari maqsadli taqsimotni tushunish uchun foydali qoʻshimcha maʼlumot berishi va potentsial kutilmagan bogʻlanish haqida ham maʼlumot berishi mumkin. Inson toʻqimalari yordamida-toʻqimalarning oʻzaro reaktivligini oʻrganish antikor preparatlari uchun dastlabki klinik dozalash xavfsizligini baholash seriyasining ajralmas qismi hisoblanadi. Maqsadli bog'langan hayvonlar turlari mavjud bo'lmaganda, to'qimalarning o'zaro reaktivlik-ma'lumotlari, ayniqsa, odamlarning zaharlanish xavfini bashorat qilishda muhim ahamiyatga ega. Kechki bosqichdagi oʻsma belgilari uchun moʻljallangan ADClar uchun hayvonlarning tegishli turlarida toksikologik taʼsirlarni baholashdan keyin alohida tashvishlar boʻlmasa, toʻqimalarning oʻzaro reaktivligini oʻrganish shart emas.
Hozirda ICH, FDA, NMPA va boshqa idoralar ADClarning klinik boʻlmagan farmakologiyasi va toksikologiyasi-tadqiqotlari uchun tegishli texnik koʻrsatmalarni chiqargan. Tadqiqotchilar dorilarning xususiyatlariga asoslanib, -klinik bo'lmagan farmakologiya va toksikologiya tadqiqotlarini loyihalashtirib, odamlarga -klinik bo'lmagan farmakodinamik ta'sirlar va toksiklik reaktsiyalarini maksimal darajada oshirish, klinik qo'llanmalarda ADC ning samaradorligi va xavfsizligini bashorat qilish, shu tariqa trilinikalarning rivojlanish xavfi va muvaffaqiyatini oshirishi mumkin. Dori vositalarini ishlab chiquvchilar ilmiy jihatdan standartlashtirilgan klinik boʻlmagan{6}}tadqiqotlarni qoʻllab-quvvatlash maʼlumotlarini olish uchun dastlabki tadqiqot natijalari va mavjud muammolar asosida nazorat qiluvchi idoralar bilan bogʻlanishi mumkin.
