Oligonukleotidli preparatlar birinchisi 1978 yilda tug'ilganidan beri 40 yildan ortiq vaqt davomida ishlab chiqilgan. Biroq, ularning rivojlanishi o'ziga xos beqarorligi va hujayralarni qabul qilish samaradorligi pastligi sababli boshqa dori turlariga qaraganda sekinroq edi. Yangi etkazib berish tizimlari va kimyoviy modifikatsiya usullarining paydo bo'lishi bu muammolarni sezilarli darajada yaxshiladi va oligonukleotid preparatlari so'nggi yillarda tez rivojlanishni ko'rsatdi. Hozirgi vaqtda antikorlar va boshqa biologik preparatlarning immunogenligini baholash bo'yicha ko'rsatmalar va sanoat oq qog'ozlari mavjud, ammo hayvonlarda yoki bemorlarda oligonükleotid preparatlarining immunogenligi to'g'risida hali ham kam ma'lumotlar mavjud va tizimli ko'rsatmalar mavjud emas. Oligonükleotidli dorilarning immunogenligi to'g'risidagi cheklangan tushuncha ham ushbu dorilar sinfining rivojlanishini sezilarli darajada cheklaydi.
Dorining immunogenligining kaliti immunitet tizimi preparatni o'zini o'zi tan olishi va unga toqat qila oladimi yoki yo'qligini ko'rib chiqishdir, immunogenlikka ta'sir qiluvchi boshqa jihatlarga yuborish yo'li va davolanayotgan o'ziga xos kasallik kiradi (1-rasm).
Shakl 1 Immunogenlikka ta'sir qilish usullari (Front. Immunol., 18 avgust 2020 sek. Vaktsinalar va molekulyar terapevtiklar)
Dori xususiyatlari: Ko'pgina tipik biologik preparatlar (masalan, monoklonal antikorlar) bilan solishtirganda, oligonükleotid preparatlari nisbatan kichik bo'lib, katta proteinli hamkasblarga qaraganda kamroq potentsial epitoplarni o'z ichiga oladi, shuning uchun ular odatda past immunogenlikka ega deb hisoblanadilar. Biroq, oligonukleotid molekulalari va immunitet tizimi o'rtasidagi o'zaro ta'sir murakkab bo'lib, tug'ma immunitetni keltirib chiqarishi mumkin. Oldingi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, siRNK ketma-ketligi tollga o'xshash retseptorlar (TLR) orqali immun stimulyatsiyasiga ta'sir qilishi mumkin va guanin va urasil asoslariga boy siRNK ketma-ketligi ko'proq immun stimulyator faolligini keltirib chiqaradi. Oligonükleotid preparatlarining barqarorligi, xavfsizligi, hujayrali so'rilishi va samaradorligini oshirish uchun, odatda, yangi avlod oligonükleotid preparatlarini ishlab chiqish jarayonida ularga kimyoviy modifikatsiyalar qo'llaniladi. Nuklein kislota magistralining modifikatsiyalari, ribozaning glikozil qismi va nukleobazaning modifikatsiyalari keng tarqalgan bo'lib qo'llanilgan va bu modifikatsiyalar immunitet reaktsiyalarini kuchaytirishi mumkin. Bundan tashqari, mikroorganizmlarga o'xshash nuklein kislotalar ketma-ketligi ham immun stimulyator potentsialiga ega bo'lishi mumkin, shuning uchun yangi oligonükleotidlar ketma-ketligi yuqori immunogenlikka ega bo'lishi mumkin.
Qo'llash yo'li: Oligonukleotid preparatlari vena ichiga va to'qimalarga yuborish, og'iz va teri ostiga yuborish kabi turli xil yuborish yo'llari orqali ta'sir qilishi mumkin (2-rasm).
2-rasm Oligonukleotidli dori vositalarini qabul qilish va yuborish usullari (Nat. Nanotechnol. 16, 630–643 (2021).)
Hozirgi vaqtda tasdiqlangan oligonükleotid preparatlari asosan immuniteti cheklangan joylarga-etkazib berish orqali harakat qiladi, biroq oligonukleotid preparatlarini turli toʻqimalarga samarali yetkazib berish oligonukleotidlarning membranalardan oʻtishi qiyinligi tufayli hali ham oligonukleotid preparatlarini ishlab chiqishda asosiy muammo boʻlib qolmoqda. Etkazib berish tashuvchilarning rivojlanishi bu muammoni sezilarli darajada hal qildi va etkazib beruvchilar ikki darajali darajada o'zgarib turadigan va turli mexanizmlar orqali harakat qila oladigan immunitet reaktsiyalarini keltirib chiqarishi mumkin. Turli xil etkazib beruvchilar siRNK molekulalarini hujayra membranalari orqali o'ziga xos usullar bilan etkazib beradi (2-rasm), siRNKni har xil miqdor va naqshni aniqlash retseptorlari (PRR) turlariga ta'sir qiladi va bu ularni tug'ma immunitet tan olinishiga ko'proq moyil qiladi. Bundan tashqari, GalNAc (N-atsetillangan galaktozamin) konjugasiyasi va lipid nanozarrachalar (LNP) tashuvchilarni etkazib berishning hozirgi keng tarqalgan usullari asosan immunogenlik xavfi yuqori bo'lgan tomir ichiga va teri ostiga in'ektsiyadir. So'nggi yillarda endogen pufakchalar, sferik nuklein kislotalar va nanotexnologiya ilovalari kabi yangi oligonükleotid dori vositalarini etkazib berish usullari ham rivojlanmoqda, bu ham immunogenlik testida yangi muammolarni keltirib chiqaradi.
Oligonukleotidli dorilarning immunogenligini tahlil qilish strategiyasi
Immunogenlik dori vositalarining samaradorligi va xavfsizligi bilan yuqori darajada bog'liqligini hisobga olib, oligonükleotidli dorilarning rivojlanishi va klinik sinovlarini qo'llab-quvvatlash uchun immunogenlik tahlili zarur. Proteinli preparatlarga nisbatan qo'llaniladigan ko'plab bioanalitik tamoyillar, asosan, ierarxik immunogenlikni tahlil qilish strategiyasiga rioya qilgan holda, oligonukleotid preparatlariga ham taalluqlidir, ammo biz oligonukleotid preparatlarining noyob tarkibiy qismlarini, qo'llash yo'llarini va immun reaktsiyalarining murakkabligini oshiradigan ta'sir joylarini va bioanalitik usullarni hisobga olishimiz kerak.
Oligonukleotidli dorilarning xususiyatlaridan kelib chiqqan holda, ularning immunogenligini tekshirishda bir oz e'tibor berish kerak: 1)Giyohvand moddalarga qarshi antikorlar (ADA){0}}dori modifikatsiyasi komponentlari, etkazib berish moddalari va etkazib berish vositalari tomonidan ishlab chiqarilishi mumkin bo'lgan moddalar to'liq baholanishi kerak; 2) Oligonükleotid preparatlari turli xil qo'llash yo'llariga ega, biz har xil turdagi namunalarda turli xil immunoglobulin antikorlarini aniqlashga e'tibor qaratishimiz kerak; 3) Mavjud ma'lumotlarga ko'ra, an'anaviy dorilar bilan solishtirganda, oligonükleotidli dorilar tomonidan qo'zg'atilgan ADA reaktsiyasi ba'zan sekin, ehtimol bir necha oy davomida rivojlanadi. Shuning uchun, rivojlanishning dastlabki bosqichida immunogenlik xavfini baholashda, ushbu bosqichda namunalarni saqlash va keyingi va asosiy tadqiqotlar uchun ma'lumotlarni taqdim etgan holda, klinikada ta'sirlangan yangi ma'lumotlarga asoslanib, ularning immunogenligini tekshirish tavsiya etiladi.
siRNK preparatlarini ishlab chiqish va klinik sinovlarini qo'llab-quvvatlash uchun Pharmaron siRNA tomonidan ishlab chiqarilgan ADAlarni aniqlash usulini ishlab chiqdi va usulni yaratish jarayonida ba'zi fikrlar va takliflarga ega:
Protein antikorlaridan turli xil tuzilishga ega bo'lganligi sababli, an'anaviy protein etiketlash usullari siRNA dori belgilariga taalluqli emas va biotin va digoksinni birlashtirgan yangi etiketlash usuli muvaffaqiyatli qo'llanildi;
siRNKning zaif immunogenligi tufayli tayyorlangan musbat nazorat qiluvchi antikorning yaqinligi yomon. Aniqlash bosqichlarini doimiy ravishda optimallashtirish orqali usul sezgirligi joriy me'yoriy talablarga javob berdi.
