Gen terapiyasining biologik tahlili haqida qisqacha ma'lumot

Gen terapiyasining biologik tahlili - bu gen terapiyasi mahsulotlarini farmakokinetikasi, farmakodinamikasi, immunogenligi, xavfsizligi va in vivo boshqa jihatlari bo'yicha ilmiy baholash. Gen terapiyasi mahsulotlari genetik yoki orttirilgan kasalliklarni davolash uchun ekzogen genlar yoki genlarni tahrirlash usullaridan foydalanadigan, yuqori o'ziga xoslik, uzoq davom etish va potentsial samaradorlik xususiyatlariga ega bo'lgan yangi turdagi dori vositalaridir. Hozirgi vaqtda gen terapiyasi mahsulotlari asosan yalang'och DNK, RNK, vektor vositachiligida gen transferi va genlarni tahrirlashni o'z ichiga oladi.

Vektor vositachiligida gen o'tkazish - bu maqsadli genni maqsadli hujayralarga etkazish uchun virusli yoki virusli bo'lmagan vektorlardan foydalanish, uni hujayralardagi xost genomiga ekspress qilish yoki integratsiya qilish. Vektor vositachiligida gen transferi eng ko'p qo'llaniladigan gen terapiyasi usuli bo'lib, klinik ilovalar uchun eng istiqbolli usullardan biridir. Ular orasida adeno-assotsiatsiyalangan virus (AAV) vektori yuqori xavfsizlik, past immunogenlik, keng xost diapazoni va barqaror ekspressiya afzalliklariga ega bo'lgan konvertsiz, bir zanjirli DNK nuqsonli virusdir. Bu gen terapiyasining eng ideal vektorlaridan biri hisoblanadi.

AAV asosidagi gen terapiyasi preparatlari uchun bioanalitik strategiya uning maxsus dori mexanizmi va dori xususiyatlariga ko'ra shakllantirilishi kerak. Umuman olganda, quyidagi jihatlarni hisobga olish kerak:

1. Giyohvand moddalarga ta'sir qilish: qondagi yoki boshqa biologik namunalardagi AAV vektori va maqsadli genning kontsentratsiyasi yoki nusxasi soni, preparatning in vivo tarqalishi va klirensini aks ettiradi. Aniqlash uchun odatda real vaqtda kantitativ PCR (qPCR) usuli qo'llaniladi.
2. Biologik taqsimot: AAV vektori va maqsadli genning turli to'qimalar va organlarda tarqalishi, in vivo jonli ravishda preparatning maqsadli va to'qimalarga xosligini aks ettiradi. Aniqlash uchun odatda qPCR yoki in situ gibridizatsiya (ISH) usuli qo'llaniladi.
3. Doimiylik va klirens: AAV vektori va maqsadli genning in vivo jonli yashash vaqti va yo'q qilish yo'li, in vivo jonli ravishda preparatning barqarorligi va metabolizmini aks ettiradi. Aniqlash uchun odatda qPCR yoki ISH usuli qo'llaniladi.
4. Virusli ajralish: AAV vektorining ekskretsiya yoki sekretsiya orqali tanadan tashqariga chiqarilishi yoki ajralib chiqishi ehtimoli, bu preparatning atrof-muhit va boshqalar uchun potentsial xavfini aks ettiradi. Aniqlash uchun odatda qPCR yoki yuqumli tahlil usuli qo'llaniladi.
5. Immunogenlik: AAV vektori va maqsadli genning organizmda immunitet reaktsiyasini keltirib chiqarishi, preparatning tananing immunitet tizimiga ta'sirini aks ettiruvchi. Odatda ELISA yoki elektroximiluminesans (ECL) usuli anti-AAV antikorini yoki anti-maqsadli protein antikorini aniqlash uchun ishlatiladi va ELISPOT yoki oqim sitometriyasi usuli hujayra immunitetini aniqlash uchun ishlatiladi.
6. Immun toksikligi: AAV vektori va maqsadli genning organizmda immunitet bilan bog'liq salbiy reaktsiyalarni keltirib chiqarishi, bu preparatning organizm xavfsizligiga ta'sirini aks ettiradi. Odatda Bio-Plex yoki ECL usuli sitokinlarni yoki yallig'lanish omillarini aniqlash uchun ishlatiladi va qon yoki jigar faoliyatini aniqlash uchun gematologik yoki biokimyoviy usullar qo'llaniladi.